1. Vorbereitung vor der Operation
1. Reinigung und Desinfektion
Demolitionsreinigung: nach dem Abbau der Reaktorteile (Tank, Leitung, Elektrode usw.), mit Waschmittel und 1% Natriumhydroxidlösung getränkt und gereinigtem Wasser mehr als 10 Mal gespült.
Desinfektionsbehandlung: Die gereinigten Teile werden 30 Minuten lang mit Desinfektionsflüssigkeit (proportional verdünnt) eingeweicht und nach dem Trocknen den direkten Kontakt mit der Oberfläche vermeiden.
Sensorwartung: Die pH-Elektrode ist in gesättigte KCl-Lösung eingetaucht, die Elektrode des gelösten Sauerstoffs (DO) ersetzt den Elektrolyten und entfernt die Blasen, polarisiert für mehr als 6 Stunden.
2. Tankmontage
Dichtung: Ausrichten Sie den Behälterdeckel auf den Behälterboden und schrauben Sie die Schraube mit dem inneren Sechseckwerkzeug gleichmäßig an, um die Dichtung zu gewährleisten.
Rohrverbindung: Füllstoffflaschen, Abgasflaschen, Probenaufnahmeflaschen usw. über Silikonrohre oder Schnellverbindungen anschließen, und die Elektrode wird manuell angespannt, nachdem sie die entsprechende Schnittstelle eingesetzt hat.
II. Tankbetrieb
1. Zelleimpfung
Die vorkultivierte Zellsuspension wird gleichmäßig vermischt und gezählt, in die Impfflasche übertragen und steril mit dem Reaktoreingang verbunden.
Verwenden Sie Druckluft, um die Zellsuspension in den Reaktor zu drücken, um die Ablagerung der Zellen zu vermeiden.
2. Initialisierung der Parameter
Umgebungseinstellung: Die Temperatur ist auf 37 ° C (Säugetierzellen), 40% gelöster Sauerstoff, pH-Wert von etwa 7,0, die automatische Einstellung wird durch das Steuerpanel gestartet.
Zusatzstoffe und Belüftung: Die Peristaltische Pumpe steuert die Flüssigkeitsgeschwindigkeit, das Zuluftsystem regelt den Sauerstoffdruck auf 0,1 MPa, um die Stabilität des gelösten Sauerstoffs zu gewährleisten.
III. Kultivierungsprozesskontrolle
1. Dynamische Überwachung
Sensorverbindung: Überwachung von Temperatur, pH, DO und anderen Parametern in Echtzeit und automatische Regelung der Rührgeschwindigkeit (100-300 U/min) und der Zusatzgeschwindigkeit.
Online-Probenahme: Die Probenahme untersucht alle 24 Stunden die Zelldichte und den Stoffwechselstand, und nach der Probenahme wird das Ende der Rohrleitung mit 75% Alkohol eingetaucht, um Kontaminationen zu verhindern.
2. Verschmutzungsschutz
Während des gesamten Betriebs bleibt eine sterile Umgebung erhalten und die Schnittstelle mit Flammen desinfiziert, um das Eindringen äußerer Verunreinigungen zu vermeiden.
4. Tankbetrieb und Wartung
1. Beendigung der Kultivierung
Schalten Sie das automatische Steuermodul aus und trennen Sie die Elektrode durch Druckluft, indem Sie die Kulturflüssigkeit in den Abfallfässer entlassen.
2. Reinigung und Lagerung
Entfernen Sie die Tankkomponenten und spülen Sie sie mit gereinigtem Wasser über Nacht in einer 0,1 M NaOH-Lösung ein, um biologische Rückstände vollständig zu entfernen.
Nach dem Trocknen in einer Belüftung gelagert und die Elektroden separat in einer speziellen Verpackung gelagert.
V. Wichtige Hinweise
1, Dichtungsprüfung: Nach der Montage müssen Drucktests durchgeführt werden, um Leckagen während des Kultivierungsprozesses zu vermeiden.
Parameterkalibrierung: pH- und DO-Elektroden müssen vor jedem Gebrauch korrigiert werden, um die Genauigkeit der Daten sicherzustellen.
3. Größenverstärkung: Folgen Sie dem konstanten Belüftungsvolumen und dem Flüssigkeitsvolumenverhältnis (VVM), um die Effizienz der gelösten Sauerstoffübertragung zu gewährleisten.
Durch die oben genannten Schritte können Zellbioreaktoren aus Edelstahl eine stabile Zellkultur von Labor bis zur mittleren Testskala erreichen, die sich für hochpräzise Bioprozesse wie Antikörperproduktion und Impfstoffentwicklung eignet.