1. Vorbereitung vor dem Aufladen
Zubereitung der Zellsuspension: Sammeln Sie die vorkultivierten Zellen aus einer Shaker- oder Petrischale und nehmen Sie 1 ml zur Zellzählung nach dem Vermischen, um sicherzustellen, dass die Impfdichte geeignet ist.
Sterilisation von Geräten: Überprüfen Sie, ob Reaktortanks, Rohrleitungen und Elektroden sterilisiert wurden (z. B. 121 ° C Hochdruckdampfbehandlung), um mikrobielle Verschmutzung zu vermeiden.
3, Medium und Puffer: Vorbereiten Sie eine ausreichende Menge an Medium und voreinstellen Sie den pH auf den Zielbereich (z. B. 7,2-7,4), nachdem Sie sterilisiert sind, kühlen Sie die Reserve.
Impfung und erste Kultivierung
1, steriler Betrieb: Im Biosicherheitsschrank wird die Zellsuspension durch sterile Leitungen in den Reaktor übertragen und gleichzeitig in die Druckluft-Hilfsmischung gelangen.
2. Parametereinstellung:
Temperatur: Säugetierzellen werden normalerweise auf 37 ° C eingestellt.
Lössener Sauerstoff (DO): Anfangs auf 40% eingestellt und durch eine Gasmischung (O₂/N₂/CO₂) stabil gehalten.
pH-Kontrolle: Verwenden Sie eine Peripheralpumpe, um Säure / Alkali oder CO2-Einleitung zu ergänzen, um den pH bei 6,5-7,0 zu halten (je nach Zelltyp angepasst).
3. Überwachung des Kulturprozesses
Regelmäßige Probenahme: Alle 24 Stunden online Probenahme, um die Zelldichte, pH und die Konzentration von Metaboliten (wie Glukose, Milchsäure) zu erkennen.
2, Zusatz von Nahrungsergänzungsmitteln: Abhängig vom Nährstoffverbrauch wird ein konzentriertes Medium oder eine bestimmte Komponente (z. B. Aminosäuren) hinzugefügt, um die Zelllogarismus-Wachstumsperiode zu verlängern.
Schnerkraftregelung: Verwenden Sie eine niedrige Drehzahl (z. B. 50-100 U/min) oder einen Wellenreaktor, um mechanische Schäden zu vermeiden.
4. Ernte und Reinigung
1. Beenden der Kultur: Schalten Sie das automatische Steuersystem aus, wenn die Zelle in die Fällzeit eintritt oder die Akkumulation des Produkts ihren Höhepunkt erreicht.
2. Abflüssigkeit und Sammlung: Durch Druckluft entlassen Sie die Kulturflüssigkeit in den Abfallfässer und trennen Sie die Zellen von der Oberflüssigkeit.
3, Reinigung und Sterilisation: Spülen Sie Tanks und Komponenten mit gereinigtem Wasser, 0,1 M Natriumhydroxid über Nacht einweichen, um sicherzustellen, dass keine Rückstände vorhanden sind.
5. Achtung
Sterile Operation: Verschmutzung muss streng vermieden werden und Handschuhe und Werkzeuge vor dem Betrieb desinfiziert werden.
2. Parameterkalibrierung: Regelmäßige Prüfung des pH-Werts und der gelösten Sauerstoffelektrode, um sicherzustellen, dass die Daten genau sind.
Vergrößerung der Produktion: Batch-Betrieb kann direkt auf industrielle Größe (z. B. 12000L) vergrößert werden, aber die Optimierung der Rühren- und Masseneffizienz ist erforderlich.
Durch die oben genannten Schritte kann der Betrieb des Zellkulturbioreaktors effizient abgeschlossen werden, der für die Herstellung von monoklonalen Antikörpern, Impfstoffen und anderen biologischen Produkten geeignet ist.