2025Jahr9Monat, von mehreren Institutionen wie der Kyoto University Graduate School of Medicine Dermatologievon Naomi KitayamaDas Forschungsteam in derBiochemische und biophysikalische ForschungskommunikationIn der Zeitschrift mit dem TitelTargeting PAR-2 in atopischer Dermatitis: Präklinische Bewertung des neuen Inhibitors E6795Forschung. Die Studie konzentriert sich auf die topische Dermatitis (ADPathologischer Mechanismus der Aktivierung von Rezeptoren gegen neue Protease2（PAR-2Kleinmolekulare InhibitorenE6795Eine präklinische Bewertung wurde durchgeführt, um eine Verbesserung zu untersuchen.ADEntzündung, Juckreiz und Hautbarrieredysfunktion.

Zusammenfassung

Atopische Dermatitis (ADist eine chronische entzündliche Hauterkrankung, gekennzeichnet durch Ekzemähnliche Hautverluste, starken Juckreiz und eine geschädigte Hautbarrierefunktion. Trotz der Entwicklung neuer Therapien stehen viele Patienten immer noch vor Problemen wie unzureichender Krankheitskontrolle, hohen Behandlungskosten und Rückfall. Protease Aktivierungsrezeptoren2（PAR-2(in derADÜberexpression im Hautverlust spielt eine Rolle bei der Förderung der Entzündungsreaktion, der Erzeugung von Juckreiz und des epidermalen Ungleichgewichts. Diese Studie bietetE6795Präklinische Studienbeweise zeigen, dass die Verbindung ein kleines Molekül ist, das speziell für die obigen pathologischen Prozesse entwickelt wurdePAR-2Inhibitoren. Kinase- und pharmakologische Analysen bestätigen,E6795Selektive UnterdrückungPAR-2Extrem geringe Off-Target-Interaktionen wurden in einer breiten Palette von Kinase- und Pharmakologieprüfungen gezeigt. Außerdem,E6795Es wurde in beiden Mausmodellen verbessert.ADRelevante Endpunktindikatoren, einschließlich der Verringerung der Entzündungsreaktion und Immunzellen-Invasion; Die orale Verabreichung verringert den menstrualen Feuchtigkeitsverlust (TEWLund)2%Lokale Creme-Präparate verbessern die histologische Leistung und die Juckreizsymptome im Zusammenhang mit der Barrierefunktion. Organismologische Untersuchungen bestätigen,E6795Nach der Behandlung wird die Influenz entzündlicher Zellen verringert und die Funktion der Hautbarriere verbessert. Die Ergebnisse zeigen,E6795Durch selektive UnterdrückungPAR-2Signalleitung, gezielte WirkungADDie drei Säulen der Pathophysiologie——Barrieredysfunktion, Entzündungsreaktionen und Juckreiz. Diese Studie betontE6795Als kostengünstiges neues ModellADPotenzial der lokalen Medikamente.

ExperimenteMaterialien und Geräte

a) Versuchsmaterial

1. Versuchstiere:11-12Männlich im WochenalterNc/NgaMäuse,6-14Weiblich im WochenalterBALB/cMäuse,6-10Männlich im WochenalterC57BL/6JMäuse.

2. Reagenzien und Antikörper:MC903undE6795undPAR-2AufregungspeptideSLIGKV-NH8322ndle;undSLIGRL-NH ₂Panproteinase, Kogulansase, Carboxymethylcellulose, Dimethyl, Uratan, verschiedene fluoreszierend markierte Antikörper,FLIPRKalziummessmittel, KollagenIITyp,DNase I、10%Formalin, Sumigin-Errot-Färbungsmittel, Methylamin-Blau-Färbungsmittel usw.

3. Zell- und Gewebeproben: Embryonale NierenHEK293Zellen, gesunde menschliche Hautproben,ADSchäden an der Haut des Patienten.

2) Versuchseinrichtungen

FDSS6000Fluoreszenz-Testsysteme,FACS FortessaFlusszellometer,FlowJo istSoftware, Dickenmesser, Kratzenmesssysteme,384Polypropylen-Lagerplatten,IchTyp Kollagen Beutel mit transparentem Boden schwarz384Bohrplatten, Lüftungskäfige, Mikroskope und Bildanalysesysteme,ASCHVaposcanTransdermale Feuchtigkeitsverlustmessgerät

ASCH VAPOSCANTransdermale Feuchtigkeitsverlustmessgerät

Experimentelle Prozesse

1. Zellversuche:HEK293Zellen enthalten3%Kuhserum.DMEMIn einem Kulturmedium kultiviert, impft384Nachladung der BohrplatteFLIPRKalziummessungsmittel mit unterschiedlichen KonzentrationenE6795Vorbearbeitung30Minuten, dann eine Pancreatase oder Kogulase hinzufügen, durchFDSS6000Systemüberwachung120Echtzeit-Fluoreszenz-Intensität in Sekunden mit vier ParameternLogistikModellberechnungIC₅₀Wert.

2. Tiermodell und Dosierung:

￮MC903InduzierenADModell:BALB/cMaus Ohren kontinuierlich8Tag lokal anwendenMC903Von der4täglich oral enthaltenE6795Die Carboxymethylcellulose-Mischung wurde der Kontrollgruppe das entsprechende Lösungsmittel gegeben.

￮Nc/NgaErnstADModell: Werden an Dermatitis leidenNc/NgaMäuse unterteilt5Gruppen, täglich lokal auftragenE6795Kreme, dauerhaft7Tag, Seth behandelt keine Gruppe als biologische Kontrolle.

3. Pharmakologische Bewertung:

Hautbarriere Funktion: DurchASCHVaposcanTransdermale FeuchtigkeitsverlustmessgerätMessung0、3、7Tages FeuchtigkeitsverlustWerte（TEWL）； Messung der Maus-Ohrdicke täglich mit einem Dickenmeter.

ASCH VAPOSCANTransdermale Feuchtigkeitsverlustmessgerät

（(c)）第3 Tag und Tag7 Wasserverlust am Tag (TEWL(Testergebnisse). Im Vergleich zur LösemittelkontrollgruppeE6795Die orale Verabreichung in7 Tag kann deutlich reduziert werdenTEWLDie Daten werden falsch im Mittelwert ± Standard dargestellt (außer8 Tägliche orale Dosierungn = 3Außerdem die übrigen Gruppenn = 4).* Nach der KorrekturP < 0,05im Vergleich zur Lösemittelkontrollgruppe (Dunnett-Test)

￮Juckreizverhaltensprüfung: in der7Himmel17:00Bis zum nächsten Tag07:00Die Mäuse werden in einen einzelnen Messkäfig gesetzt.2Nach Stundenanpassungszeiten durch Kratzenmesssystem erfasst12Frequenz des Verhaltens innerhalb der Stunde.

￮Histologische und Immunhistochemische Analyse: Experimentelle Endpunktsammlung von Maus-Ohrhautgewebe nach Formaldehydfixierung und Paraffinverpackung5 μmSchneiden, durchführenvon H&EFärbung (zur Beobachtung von entzündlicher Zellinversion und Epidermis-Dicke), Methylaminblaue Färbung (zur Zählung von Fettkörperchen) undPAR-2Immunochemische Färbung; Die menschliche Hautprobe wird ebenfalls durchgeführt.PAR-2Immunochemischer Test.

￮Flow-Zytometrie-Analyse: Maus Ohr Hautgewebe durch enzymatische Herstellung einer Einzelzell-Suspension, nach der Färbung mit fluoreszierend gekennzeichneten Antikörper, durchFACS FortessaErkennung von Acidophilen, Neutrophilen,CD4⁺TDie Invasion von Immunzellen-Subpopulationen wie Zellen, Alkaliphilen und anderen ist durch die absolute Anzahl von Zellen pro Quadratmillimeter Ohrhut ausgedrückt.

4. Pharmakokinetische Studien: Erkennung in MäusenE6795Freie Plasmafraktion, Freie Vollblutfraktion und Blut-Puppet Verhältnis, um ihre körperliche Absorption und Verteilung Eigenschaften zu bewerten.

5. Selektive Analyse: durch Kinase selektive Panel undCEREPPharmakologische Kombinationsplatten, Prüfung1μMund10μMunter KonzentrationE6795Die Inhibition einer Vielzahl von Kinasen, Rezeptoren und Ionenkanälen zur Beurteilung ihrer Off-Target-Aktivität.

6. Statistische Analyse: VerwendungGraphPad Prism 7.03Software zur Einfaktor-Varianz-Analyse (Einweg ANOVA(Kombination)DunnettMehrere Vergleichsprüfungenα = 0,05Für die Prüfung sind die Daten im Durchschnitt±Standardfehler (Mittelwert±SEM(Dargestellt).

Experimentelle Schlussfolgerungen

1. E6795Wirksam und selektivPAR-2Inhibition der Aktivität, die Messung des zellulären Kalziumflusses in ihrerIC₅₀Wert für6,56 nMJa, genau.PAR-1Keine Inhibition und extrem geringe Off-Target-Aktivität in einer Vielzahl von Kinase- und Pharmakologischen Panels.

2. Pharmakokinetik anzeigenE6795orale Absorption, obwohl die Plasmaproteinbindung hoch ist97.5%Allerdings kann eine kleine Menge freier Medikamente eine therapeutische Wirkung spielen.

3. Immunschemie bestätigtADPatienten in ZellenPAR-2Der Ausdruck von gesünderen Menschen steigt.

4. inMC903InduziertADIm Mausmodell,E6795Sowohl die orale als auch die topische Verabreichung verringert die Acidophile-Invasion und die orale Verabreichung kann verringert werden.TEWLVerbesserung der Hautbarrierefunktion, die lokale Verabreichung kann die Ohrdicke verringern.

5. inNc/Nga ADIm Mausmodell,2 % E6795Die Creme verringert die Epidermatisdicke, die Invasion von Fetozellen und das Krabberverhalten und verbessert die histologische Leistung im Zusammenhang mit Dermatitis.

6. E6795Durch selektive UnterdrückungPAR-2Signale, ZieleADDie drei Kerne der Pathophysiologie (Entzündung, Juckreiz, Barrierenfunktion) haben das Potenzial als kostengünstige, minimal invasive topische Medikamente.