Toru NishikawaTeam veröffentlicht in„Journal der Internationalen Zahnmedizin»ForschungDurch Kettenureazomectin (STZInduzieren Sie den Aufbau eines Diabetes-Rattenmodells, in dem Sie eine experimentelle Periodontitis induzieren, um Stickoxid (NEIN(Der Weg istSchwerpunktUntersuchen Sie den Mechanismus der Verschlechterung der Periodontischen Erkrankung im Zustand von Diabetes und konzentrieren Sie sich auf die Analyse des Blutflusses des Zahnfleisches und der entzündlichen Geneα/TNF-αInduzierte Stickoxidsynthese/ iNOSAusdruck und Veränderungen des Nitro-Stress-Markers (Nitrotyrosin).

Zusammenfassung

Zur Erkenntnis der Mechanismen der Verschlechterung der Periodontischen Erkrankung im Zustand von Diabetes wurde diese Studie durch Kettenureazomectin (STZInduzieren Sie den Aufbau eines Diabetes-Rattenmodells, in dem Sie eine experimentelle Periodontitis induzieren und Stickoxid (NEIN(Der Weg istSchwerpunktStarten Sie eine Diskussion.

Material und Methode: Ja. 5 Männlich im WochenalterSDRatten, durch Injektion im BauchSTZ（60 mg/kg(Diabetes verursachen).STZInjektion2 Wochen später im zweiten Molar auf der rechten Oberkiefer (der M2(Nylon-Draht für den Zahnhals)3:0 Surgilonzur Induktion einer experimentellen Periodontitis, die Seite dient als experimentelle Seite; Die andere Seite wird nicht als Kontrollseite behandelt. Experimentelle Periodontitis induziert2 Wochen später wurde zunächst der Blutfluss des Zahnfleischgewebes gemessen, anschließend wurden Ratten getötet und die Genexpressionsanalyse und histologische Untersuchung des Zahnfleischgewebes durchgeführt.

Der Blutfluss des Zahnfleisches auf der Kontrollseite von Diabetesratten war deutlich niedriger als auf der Kontrollseite von normalen Ratten. Ob bei normalen oder diabetischen Ratten wurde der Blutfluss im Zahnfleischgewebe nach einer Periodontitis im Vergleich zur jeweiligen Kontrollseite signifikant erhöht. Genexpressionsanalyse zeigt, dass bei normalen Ratten nach Periodontitis induziertTNF-αObwohl die Genexpression zunimmt, gibt es keine statistischen Unterschiede.iNOSsignifikant erhöhte Genexpression; Diabetes bei Ratten, nach Periodontitis induziertTNF-αundiNOSDie Genexpression erhöht sich deutlich. Histologische Untersuchungen zeigten, dass die Periodontitis-induzierten Stellen bei normalen Ratten nur leichte entzündliche Zellinnentration aufweisen, während bei Diabetesratten signifikante entzündliche Zellinnentration auftreten konnte. Eine weitere Analyse der Nitrotyrosin-Expression im Zahnfleischgewebe ergab, dass Nitrotyrosin-positive Zellen an den Orten, an denen die Periodontitis bei normalen Ratten induziert wurde, sichtbar waren, aber die Anzahl der Nitrotyrosin-positiven Zellen bei diabetischen Ratten nach der Periodontitis signifikant erhöht wurde.

Diese Studie bestätigt, dass die Anzahl der Nitrotyrosin-positiven Zellen im lateralen Zahnfleischgewebe von Diabetesratten signifikant erhöht ist, was darauf hindeutet, dass Nitrotyrol-Stress eine wichtige Rolle beim Prozess der Diabetes-Fusion-Periodontität spielt; Gleichzeitig wird darauf hingewiesen, dass die Unterdrückung von Nitrogen-Stress eine der Behandlungsstrategien für Diabetes-assoziierte Periodontitis sein kann.

ExperimenteMaterialien und Geräte

a) Versuchsmaterial

1. Versuchstiere:5 Männlich im WochenalterSDRatten

2. Diabetes-Induktor: Kettenureazomectin (STZ）；Periodontische Erkrankungen induzierende Materialien: Nylon-Nähtfaden (3:0 Surgilon）；Anästhesien: (Pentobarbital）

2) Versuchseinrichtungen

1. Omegawave FLO-N1Laser Doppler Blutflussmesserzur Messung des Blutflusses im Zahnfleisch

Omegawave FLO-N1Laser Doppler Blutflussmesser

Blutfluss im Zahnfleisch

2. Echtzeit-Fluoreszenz-QuantifizierungPCRInstrument: Quantitative Analyse der Genexpression

3. Optisches Mikroskop: Beobachtung und Zellzahl nach der Färbung von Gewebeschneiden

4. Kryotemperaturlagergeräte: flüssiger Stickstoff-Tank (für das schnelle Gefrieren von Gewebe),-80℃Kühlschrank (für die Langzeitaufbewahrung von Gewebe)

5. Heizungsmatte: zur Messung des Zahnfleischblutflusses zur Aufrechterhaltung der rektalen Temperatur bei Ratten37℃

Experimentelle Prozesse

Versuchstierenzucht und Diabetesmodell

1. AlleSDRatten, die im Thermostat gezüchtet werden (23±1.0℃(ständige Feuchtigkeit)45±10%Tierzimmer, die12 Stundenweise wechselnde Licht- und Dunkelzyklen, Leitungswasser über eine automatische Wasserversorgung.

2. Injektion an RattenSTZ（60 mg/kgzur Förderung von Diabetes;STZInjektion1 Testen Sie den Blutzuckerwert der Ratten nach einer Woche≥200mg/dLRatten, die als Diabetesmodell-Ratten bestimmt wurden, wurden in die Folgeexperimente aufgenommen.

(2) Experimentelle Induktion von Periodontitis

STZInjektion2 Woche später für alle Ratten (normale Ratten)+Diabetische Ratten behandelt werden: in (0,5 mg / kgUnter Anästhesie im rechten oberen Kiefer (der M2(Zahnhals mit Nylonnähtfaht)3:0 SurgilonVermeiden Sie Schäden am Zahnfleisch und befestigen Sie sie in der Nähe des Mundes (die Seite ist die experimentelle Seite); Der zweite Molar auf der linken Oberkiefer wird nicht behandelt (für die Kontrollseite).

(3) Blutflussmessung des Zahnfleischgewebes

1. nach der Induktion von Periodontitis durch Injektion in der Abdomen (0,5 mg / kg(Anästhesisieren Ratten, Laser Doppler Blutflussmesser)FLO-N1Die Sonde ist auf der Versuchs- und Kontrollseite befestigtder M2Die Wangen sind direkt oben.

2. Bei der Messung werden die Ratten25℃Heizungsmatte zur Aufrechterhaltung der rektalen Temperatur37℃Aufzeichnung des Blutflusswertes (Einheit:ml/min/100g Gewebe).

d) Organisation der Sammlung und Verarbeitung

1. Experimentelle Periodontitis induziert 2 Wochen später durch Injektion (1,5 mg / kgRatten zu töten.

2. Erfassungsexperimentelle und Kontrollseiteder M2Wangenseitiges Zahnfleischgewebe: Ein Teil wird sofort in flüssigen Stickstoff gesetzt, schnell gefriert und dann in- 80℃Kühlschrankaufbewahrung (für die Genexpressionsanalyse); Der andere Teil wird zusammen mit dem beidseitigen Oberkiefergewebe entfernt und in10%Formalin Lösung Fixierung24 Stunden (zur histologischen Analyse).

d) Genexpressionsanalyse

1. VerwendenTRIzol ReagenzExtrahieren Sie insgesamt aus gefrorenem Zahnfleischgewebedie RNANoch einmal insgesamtdie RNAAls Vorlage, mitRNase H-Reverse TranscriptasesynthetischcDNA.

2. AnwendungTaqMan Universal PCR Master MixundTaqManDie Sonde, inABI Prism 7000auf dem Instrument durchgeführtPCRReaktion, Reaktionsbedingungen95℃ 1Minuten,52℃ 1Minuten,72℃ 30Sekunden, insgesamt40 Ein Kreislauf.

3. mitGAPDHFür die Genetik, die AnwendungΔΔCtBerechnungTNF-αundiNOSdie relative Expression der Gene.

Experimentelle Schlussfolgerungen

Diese Studie bestätigte, dass die Anzahl der Nitrotyrosin-positiven Zellen im lateralen Zahnfleisch-Gewebe von Diabetes-Ratten signifikant erhöht wurde, was darauf hindeutet, dass Nitrostress eine wichtige Rolle beim Prozess der Diabetes-Fusion-Periodontität spielt; Gleichzeitig wird darauf hingewiesen, dass die Unterdrückung von Nitrogen-Stress eine der Behandlungsstrategien für Diabetes-assoziierte Periodontitis sein kann.