Punkte nutzenLUNA-FX7 ™ Automatischer Zellzähler zur Optimierung der Spermienzellenbewertung

Schlüsselwörter: Automatischer Zellzähler, bildbasierte Spermienzellenbewertung, Zellzählung, Überlebensbewertung, Doppelfärbung

1 Einleitung

Die Spermienzellenwertung (auch als Spermienanalyse bezeichnet) spielt eine wichtige Rolle bei der Beurteilung des männlichen Fruchtbarkeitspotenzials. Obwohl es keine direkte Messung der Fruchtbarkeit ist, hat die männliche Fruchtbarkeit wichtige Auswirkungen sowohl auf die menschliche Fruchtbarkeit als auch auf die Tierzucht, weshalb die Spermienbewertung sehr besorgt ist.

Derzeit können Spermienzellenbewertungen mit Flow-Zytologie und bildbasierten Analysewerkzeugen durchgeführt werden. Bestellen Sie LUNA-FX7 ™ Automatisierte Geräte wie ein automatischer Zellzähler ermöglichen die schnelle und einfache Analyse von Spermienproben mit Bildern. Da die Spermienzellen jedoch morphologisch und charakteristisch im Vergleich zu Säugetierzellen einzigartig sind, müssen die Analyseparameter optimiert und geeignete Farbstoffe ausgewählt werden.

In dieser Studie wurde eine vergleichende Analyse von fluoreszierenden Farbstoffen wie SYBR14, Pipidin Orange (AO) und Propidin Ioxid (PI) durchgeführt, um den Punkt zu LUNA-FX7 zu optimieren. ™ Bewertungsfähigkeit der Spermienzellen. Diese Studie zielt darauf ab, die Wirksamkeit verschiedener Farbkombinationen zu bewerten und die Parametereinstellung für die Spermienzellenbewertung zu optimieren.

2 Methoden und Materialien

2.1 Probenvorbereitung

Die gefrorene Samenprobe von Rindern auffrieren und den Puffer durch PBS ersetzen. Die Samenprobe wird je nach Probenzustand in PBS in einem Verhältnis von etwa 1:20 bis 1:40 verdünnt.

2.2 Fluoreszenzfärbung

1. Mischen:

Spermienzellen in 18 µL PBS

2 μL gemischte grüne und rote fluoreszierende Farbstoffe

2. 10 Minuten bei 37 ° C inkubieren

3. Laden Sie die Probe auf den geeigneten Folien

Verwenden Sie LUNA-FX7 ™ Analyse durchführen

Tabelle 1. Bestellen Sie für LUNA-FX7 ™ Optimierte Parametereinstellung für die Spermienbewertung im fortgeschrittenen Modus

3 Optimierung der Zellzählung und der Farbstoffkombination für die Spermienbewertung

ZusammenfassungDie Doppelfärbung mit SYBR14/PI und AO/PI eignet sich für die Beurteilung der Spermien-Vitalität, aber SYBR14/PI ist besser.

Bestellen Sie LUNA-FX7 ™ Das Standardprotokoll wurde für gängige Säugetierzellen optimiert, aber die Spermienzellenbewertung erfordert die Anpassung von Parametern wie Expositionsniveaus, Zellgröße und Dereunionsempfindlichkeit. Zum Beispiel wird die Mindestsuchgröße von 3 µm auf 7 µm angepasst und die Dereunionsempfindlichkeit von 5 auf 7 angepasst, um die Detektionsleistung zu verbessern (Tabelle 1). Darüber hinaus wurden die Expositionsniveaus für SYBR14/PI und AO/PI Färbung auf GF 6 bzw. RF 9 eingestellt.

Auf dieser Grundlage haben wir eine vergleichende Analyse der Färbungsmethoden SYBR14/PI und AO/PI durchgeführt. Angesichts der bekannten Wirksamkeit der SYBR14/PI-Chromatologie bei der Spermienzellenbewertung konzentrieren wir uns auf die Leistung der AO/PI-Chromatologie. Die Ergebnisse zeigen, dass beide Färbungsmethoden für die Spermienzellenbewertung verwendet werden können (Abbildung 1). Die Anwendbarkeit von SYBR14 in der Spermienfärbung ist jedoch besser als AO, was darauf hindeutet, dass die chemischen Eigenschaften von SYBR14 für diese Anwendung besser geeignet sein könnten.

Abbildung 1. Fluoreszenzbild von Spermienzellen, die mit zwei verschiedenen Farbstoffen (SYBR14/PI und AO/PI) gefärbt wurden. Das Kombinationsbild zeigt die analysierten Lichtfeld-, Grün-, Rot- und Markierungsbilder. Das markierte Bild ist ein Bild des komponierten Fluoreszenzkanals, in dem der rote Kreis die toten Zellen und der grüne Kreis die überlebenden Zellen repräsentiert.

4 Schlussfolgerungen

Diese Studie ergab, dass sowohl die SYBR14/PI- als auch die AO/PI-Chromatologie zur Beurteilung der Spermienzellenüberlebensrate verwendet werden kann, aber SYBR14/PI leistet besser. Darüber hinaus ist die Einstellung des Belichtungsniveaus und anderer Parameter für die Gesamtdetektionsleistung entscheidend. Die LUNA-FX7 ™ Es ist nicht speziell für die Optimierung von Spermienproben konzipiert, bietet jedoch durch die Optimierung der empfohlenen Probenverdünnungsverhältnisse und Bildgebungsbedingungen eine schnelle und bequeme Auswertung von Spermienzellen.