Methode der Zellzählung：Von der Zählplatte bis zum vollautomatischen Zellzähler

Viele häufige Experimente und Tests erfordern, dass Wissenschaftler zuerst die Anzahl oder Dichte der Zellen genau berechnen. Diese Operationen umfassen einfache Zellkultur Wartung (wie Zelltransmission) und quantitative Experimente (wie qPCR). Die Zellzählung kann mit einer Vielzahl von Methoden durchgeführt werden, und in diesem Artikel werden diese Methoden und ihre Vor- und Nachteile umfassend erläutert.

1 Zählplatten / BlutzellenZählenGeräte

Verwendung von BlutzellenZählenGeräteZuerst mit 70% Alkohol und Linsenpapier reinigen.ZählenGeräteDann legen Sie die Deckelschiebe vorsichtig auf das Zählbrett. Wenn die Abdeckfolie richtig platziert wird, kann das Newtonianische Ringphänomen beobachtet werden (ein konzentrisches ringförmiges farbiges Muster). Nehmen Sie einen kleinen Teil der Zellsuspension mit einer Pipette, legen Sie die Pipette an den Rand der Zählplatte und lassen Sie die Suspension durch die Kapillarität in die Zählkammer fließen. Wenn die Zellaktivität nachgewiesen werden muss, sollte Taipanblau im Verhältnis 1: 1 in die Zellsuspension vermischt werden, bevor es in die Zählkammer hinzugefügt wird.

BlutzellenZählenGeräteEs war eine frühe Methode, die speziell für die genaue Zellzählung verwendet wurde, mit speziellen Gittern auf den Zählplatten. In der Regel ist das große Quadrat 1 mm x 1 mm und wird weiter in kleine Gitter von 0,05 mm x 0,05 mm unterteilt. Der Rand der Zählkammer ist so konzipiert, dass die Deckscheibe 0,1 mm über dem Markierungsgitter befestigt wird, wodurch ein Bereich mit bekanntem Volumen gebildet wird.

Nach dem Fokus des Mikroskops auf einen Bereich des ZählraumsZählerDie Zellen zählen. In der Regel wird eine Fläche von 1 Quadratmillimeter (100 nm) verwendet und 4- oder 10-fache Objektivzählung verwendet, aber die spezifische Wahl hängt von der Zellgröße und der Dichte in der Suspension ab. Dieser Vorgang wird in der Regel in vier verschiedenen 1-Quadratmillimeter-Gebieten wiederholt, wodurch ein Durchschnittswert ermittelt wird. Wenn die Aktivität der Zelle nachgewiesen wird, sollten lebende und tote Zellen jeweils gezählt werden, von denen die toten Zellen aufgrund einer Beschädigung der Membran blau gefärbt werden.

Bild 1 BlutZellenDiagramm des Zählplattenrusters

Vorteile und Nachteile

Das manuelle Zählen ist eine Methode, um das Budget zu sparen, aber auch die zeitaufwendigste und mühsamste. Die Zuverlässigkeit ist aufgrund menschlicher Fehler, insbesondere bei mehreren Zählungen in Folge, geringer. Außerdem kann eine häufige Zählung auch zu Augenmüdigkeit führen. Wenn das Labor nur gelegentlich zählt und keine hohe Genauigkeit erfordert, dannZählerEine gute Wahl. Diese Methode ist jedoch unzureichend, wenn häufige Zählungen, höhere Genauigkeit oder Anwendungen mit hohem Durchsatz erforderlich sind. Darüber hinaus ist die manuelle Zählung schwierig, verschiedene Zelltypen in der Suspension zu unterscheiden, es sei denn, die Zelltypen unterscheiden sich erheblich in Größe oder Form.

2 Automatische ZellenZähler

Automatische ZellenZählerEine schnelle, einfache und automatisierte Alternative zur manuellen Zählung. Sie basieren auf Blutzellen.ZählerDas gleiche Prinzip erfolgt, indem man die Zellen mehrmals in einem bekannten Bereich zählt und einen Durchschnittswert nimmt. Diese Geräte unterscheiden auch zwischen lebenden und toten Zellen durch die Entfernung von Farbstoffen wie Taipanblau. Automatische ZellenZählerEs kann ein eigenständiges Gerät sein oder mit einem Computer verbunden sein. Die meistenZählerNeben der Anzahl der Zellen können auch Informationen wie die Zellgröße gemessen werden.

Anzahl der fluoreszierenden ZellenInstrumentZum Beispiel Luna-FL ™ Doppelfluoreszierende ZellzahlInstrumentLebende und tote Zellen können unterschieden werden und die Zellzählung mit gängigen Farbstoffen wie Pipidinorange und Propidinioxid durchgeführt werden. Diese Art von ZellzahlInstrumentEs ist auch ausgezeichnet, wenn es darum geht, Zellen in Kulturen zu zählen, die mit nicht-zellulären Fragmenten wie Primärzellen kontaminiert sein können, da Farbstoffe Zellen eindeutig unterscheiden können.

Vorteile und Nachteile

AutomatischZählergeeignetAllgemeinTesten der Zellzahl und der Aktivität. Es ist einfach zu bedienen, kostengünstig und reduziert den Arbeitsaufwand der manuellen Zählung erheblich. AutomatischZählerGenaue und zuverlässig, aber es kann eine Herausforderung geben, wenn die Zählung unregelmäßig geformt ist, sehr klein ist, die Suspension extrem dünn ist oder eine Vielzahl von Zellen enthält, die unterschieden werden müssen. Für die meisten Zelltypen und AnwendungenZählerbietet eine effiziente Zählleistung.

3 CoulterZähler

CoulterZählerEs ist kein optisches Instrument, sondern die Zählung der Zellen durch die Messung der Widerstandsänderungen in den Mikrokanälen. Der Widerstand der Zelle ist höher als die Suspensionselektrolytlösung und erhöht den Widerstand kurzzeitig, wenn die Zelle durch den Kanal geht, eine Veränderung, die mit der Zellgröße zunimmt. CoulterZählerDer Betrieb ähnelt dem automatischenZählerVor der Verwendung muss jedoch der Leertest durchgeführt werden und das Gerät nach der Verwendung gespült werden.

Vorteile und Nachteile

KurtZählerEs ist schnell und kann Zellen unterschiedlicher Größen genau zählen und wird daher häufig für die Blutzellzählung in Krankenhäusern verwendet. Es kann jedoch nicht zwischen lebenden und toten Zellen unterscheiden oder die Zellen, die Cluster bilden, genau zählen. Außerdem sind die Wartungsanforderungen höher.

4 Strömungszellometer

Das Flow-Zytometer wird normalerweise für detailliertere Zellanalysen verwendet und ist mit einer Fluoreszenz-Detektionstechnik ausgestattet, um markierte intrazelluläre Komponenten zu erkennen. Nicht alle Streamzellometer ermöglichen eine Zellzählung, aber ein Streamzellometer mit Volumenmessung bietet eine hochgenaue Zellzählung und unterscheidet Zelltypen durch fluoreszierend gekennzeichnete Antikörper.

Vorteile und Nachteile

Die Stromzytometrie ist leistungsstark, aber teuer, in der Regel zwischen $ 40.000 und $ 100.000 und wird daher selten für die regelmäßige Zellzählung verwendet.

5 Andere Zellzählmethoden

Spektrometrie wird gelegentlich zur Schätzung der Zelldichte verwendetGrad. Da die Zellen trüb sind, verringert sich das Licht durch die Besserscheibe, wenn die Zelldichte steigt. Da das Spektrometer jedoch keine Zellen direkt zählt, sondern nur die Absorption misst und andere Variablen in der Suspension die Absorption beeinflussen können, ist diese Methode nicht zuverlässig.

Die Kultivierung ist eine andere Zählmethode, die nur für Zellen (wie Bakterien) verwendet wird, die Kolonien bilden. Nachdem die Zellsuspension verdünnt und auf die Petrischale gestreckt wurde, zählt man die Anzahl der Kolonien, um die Zelldichte der ursprünglichen Suspension zu berechnen. Da jedoch auf das Wachstum der Kolonien warten muss, ist die Kultivierung die langsamste Methode.

Automatische Zellzähler: Genauere Zählung bringt bessere Wissenschaft

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