Elisa-Experiment: Das Problem der Elisa-Kurve

Die ELISA-Kurven sind in den meisten Fällen fehlende Standards, Bedienungen oder Geräte. Schlussfolgerung: Die Probleme mit der Kalibrierung entstehen in der Regel bei der Standardbehandlung, der Probenbehandlung oder den Inkubationsbedingungen, die sich auf diese Punkte konzentrieren, um schnell zu lokalisieren.

Häufige Ursachen für schlechte Standardkurven

Unsachgemäße Standardlösung und Verdünnung

Das Standardpulver ist nicht ausreichend gelöst oder nicht vermischt, wenn es verdünnt wird, was zu einer ungerechten Konzentration führt.

Empfehlung: Nach der Anleitung mit der angegebenen Verdünnung, nach der Auflösung kurzzeitig zentrifugieren, bei der Gradientverdünnung mit einem neuen Pistolenkopf, schlagen oder wirbeln.

Ungenaue Abtastung

Der Pipette ist nicht kalibriert, oder die Probengeschwindigkeit, der Winkel sind inkonsistent, und der Unterschied zwischen den Löchern ist groß.

Empfehlung: Kalibrieren Sie die Pipette regelmäßig, vertikal und glatt bei der Probenahme, der Pistolenkopf befestigt die Flüssigkeitsoberfläche, aber nicht den Boden berührt, um Blasen zu vermeiden.

Inkubationsbedingungen nicht konstant

Nicht verschlossene Folie oder ungedichtete Abdeckung, was zu einem Randeffekt führt; Die Temperatur ist zeitlich instabil.

Empfehlung: Verwenden Sie eine qualitativ hochwertige Dichtmembran und setzen Sie die Enzym-Markierungsplatte im Inkubator, um eine natürliche Inkubation zu vermeiden.

Andere häufige Kurvenprobleme und Antworten

Gesamt niedrig

Mögliche Ursachen: Ablauf des Reagents, nicht gelöstes Standardprodukt, nicht sofort nachgewiesen nach der Terminationsflüssigkeit, Mischung des Reagents.

Empfehlung: Nach der Anleitung das Reagenz aufbewahren, vor der Lösung des Standardprodukts zentrifugieren, die Verdünnungslösung hinzufügen und vermischen, sofort nach der Beendigung der Flüssigkeit prüfen.

Kein Signal

Mögliche Ursachen: Ablauf des Reagents, HRP-Enzym-Kontamination, Betriebsfehler (z. B. falsche Probeneinheit).

Empfehlung: Überprüfen Sie die Etiketten des Reagents, versehen Sie den Puffer mit frischem destilliertem Wasser und halten Sie das Reagentum für 30 Minuten bei Raumtemperatur im Gleichgewicht.

Gesamt hoch

Mögliche Ursachen: Der optische Dichtebereich des Enzymmarkers ist zu groß, die Arbeitsflüssigkeitskonzentration ist hoch, die Inkubationszeit ist lang und die Temperatur ist hoch.

Empfehlung: Der optische Dichtebereich ist 0-3,5, die Arbeitsflüssigkeit ist jetzt verfügbar und die Inkubationskammertemperatur ist 37 ± 0,5 ° C.

3. Optimierungsempfehlungen

Standardbehandlung: Zentrifugieren vor der Lösung und vermischen, nachdem die Verdünnung hinzugefügt wird.

Probenbetrieb: Kalibrieren Sie die Pipette, so dass die Probe vertikal glatt ist und Blasen vermieden werden.

Inkubationsbedingungen: mit einer Dichtplatte-Membran versiegelt, die Enzym-Markierungsplatte enthüllt den Temperaturinkubator.

Ausrüstungsprüfung: Kalibrieren Sie die Pipette regelmäßig, und das Enzym-Calibrator legt den richtigen Lichtdichtebereich fest.

Hinweis: Diese Produkte dienen nur der wissenschaftlichen Forschung, nicht als tatsächliche Daten, Experimente müssen die Anweisungen strikt befolgen oder einen technischen Lehrer beraten.

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