Technische Beschreibung des ELISA-Testkits für Pflanzen-1,5-Diphosphatnucleon-Carboxylase (RuBisCO)

BS-4938 Pflanzen-1,5-Diphosphatnucleon-glycocarboxylase (RuBisCO) ELISA-Kit 96T/48T

Produktübersicht

Diese Kit wird zur quantitativen in vitro Untersuchung der Aktivität von Nukleonsucker-1,5-Diphosphatcarboxylase/Addoxylase (RuBisCO) in Pflanzengewebe-, Zell- und verwandten Flüssigkeitsproben verwendet. Dieses Enzym ist das Schlüsselenzym für die Zirkulation von Calvin durch die Photosynthese der Pflanzen und seine Aktivität beeinflusst direkt die Geschwindigkeit der Photosynthese und den Lichtatmungsprozess. Dieses Kit ist mit einer Dual Antibody Intercentric Enzyme-Combined Immunasorption (ELISA) mit hoher Empfindlichkeit und Spezifikation ausgestattet.

Prüfprinzip

Die Kit verwendet die Zwei-Antikörper-Schritt-Klemmmethode:

Vorverpackte Zielenzyme in der Probe durch eine Mikroporenplatte mit Anti-RuBisCO-Monomab erfasst

Hinzufügen von HRP-Markierungen zur Detektion von Antikörpern zur Bildung eines 'Antikörper-Antigen-Enzym-Antikörper-Komplexes'

Nach reinem Waschen TMB-Substrat hinzufügen

Nach Beendigung der Reaktion wird die Absorption (OD-Wert) mit einem Enzym-Marker bei einer Wellenlänge von 450 nm ermittelt.

Die RuBisCO-Konzentration in der Probe korreliert positiv mit dem OD-Wert

Zusammensetzung des Kits

Komponenten Spezifikationen Speicherbedingungen

Vorverpackte Mikroporplatte 12 x 8 Löcher bei 4 ° C

Standardprodukt (6 Konzentrationsgradiente) 0,3 mL x 6 Röhre -20 ° C

Enzym-Antikörper 15mL 4 ℃

20 x Waschpuffer 50mL Raumtemperatur

TMB Farbdesignation A/B je 15mL 4°C Lichtschutz

Endlösung 15mL Raumtemperatur

Probeverdünnung 30mL 4 ℃

Probenbehandlung

Organisationsproben

Wägen Sie 0,1 g Gewebe, fügen Sie 1 ml Extrakt Eisbad homogen

10.000g 4 ° C Zentrifugieren 10 Minuten

Entfernen Sie die Flüssigkeit sofort zu erkennen oder -80 ° C aufbewahren (vermeiden Sie wiederholtes Gefrierschmelzen)

Zellproben

Sammeln Sie die Zell-Fällung und fügen Sie Extrakt-Lyse

10.000g 4 ° C Zentrifugieren 10 Minuten

Entfernen der Flüssigkeitsprüfung

Serum-/Flüssigkeitsproben

Raumtemperatur 2 Stunden oder 4 °C über Nacht

1.000 g Zentrifuge für 20 Minuten

Entfernen der Flüssigkeitsprüfung

Hinweis:

Probenblutlösung vermeiden

NaN3 unterdrückt HRP-Aktivität

Frische Proben haben Priorität, gefrorene Proben vermeiden wiederholtes Gefrierschmelzen

Vorgehensweise

Reagenzien vorbereiten: Alle Reagenzien vor Anwendung auf Raumtemperatur (20-25 °C) ausgeglichen

Zum Beispiel:

Standardbohrung: 50 μL unterschiedliche Konzentrationen

Probenloch: 50 μL zu messende Probe

Leere Löcher: keine

Temperaturzucht: 100 μL enzymatisch markierter Antikörper pro Loch hinzugefügt, 37 ° C Lichtschutzreaktion für 60 Minuten

Waschen: 350 μL Waschflüssigkeit pro Loch hinzufügen, nach 1 Minute trocknen lassen und 5 Male wiederholen

Farbdesignation: 50 μL Substrat A und B pro Loch hinzugefügt, 37 ° C Lichtschutzreaktion für 15 Minuten

Termination: 50 µl Termination pro Loch hinzufügen

Messung: Messung des 450 nm OD-Wertes innerhalb von 15 Minuten mit einem Enzym-Calibrator

Berechnung der Ergebnisse

Die Standardkonzentration als horizontale Koordinate und der OD-Wert als longitudinale Koordinate zeichnen die Standardkurven

Ermittlung der Konzentration auf der Standardkurve basierend auf dem OD-Wert der Probe

Probenkonzentration = gemessene Konzentration × Verdünnungsfall (falls vorhanden)

Leistungsindikatoren

Prüfbereich: 18-650 U/L

Empfindlichkeit: ≤5 U/L

Variationskoeffizient: <10%

Variationskoeffizient: <15%

Hinweise

Die Kit ist 6 Monate gültig, bei 2-8 ° C aufbewahrt

Verschiedene Batchennummern können nicht gemischt werden

Lichtschutz

Unreine Wäsche kann zu falschen Positiven führen

Endflüssigkeit enthält korrosive Substanzen, die beim Betrieb geschützt werden müssen

Alle Abfälle nach biologischen Gefahren behandelt

Benötigte Geräte

Enzymmetrie (450nm Filter)

Präzisionspipette (0,5-1000 μL)

37 ° C Thermostat

Spülmaschine (optional)

Wirbelmischer

Hinweis: Für die wissenschaftliche Nutzung, die oben genannten Informationen zur Referenz, nicht als experimentelle Grundlage, bitte konsultieren Sie den technischen Lehrer oder den Markenhändler.

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