Bedienungsanleitung für menschlichen endotelialen Wachstumsfaktor A (VEGF-A) ELISA-Kit

BS-9809 Human Vascular Endothelial Growth Factor A (VEGF-A) ELISA Kit

1. Produktüberblick

Dieses Kit verwendet die Dual Antibody Intercentric Enzyme Linked Immunabsorption Methode (ELISA), um die Konzentration von VEGF-A in menschlichem Serum, Plasma, Gewebehomoplasma, Zellkultur-Oberserum und anderen Proben zu untersuchen. Nur für wissenschaftliche Zwecke.

II. Zusammensetzung der Kit

Vorverpackt mit Mikroporenplatten: 12 Löcher x 8 (96-Loch-Spezifikation) oder 12 Löcher x 4 (48-Loch-Spezifikation), vorverpackt mit Antikörpern gegen VEGF-A gefangen.

Standardprodukt: Gefriertrocknetes Pulver, nach der Wiederlösung mit einer Standardverdünnungsflüssigkeit verdünnt werden muss (empfohlene Konzentrationsgradiente: 10, 3,33, 1,11, 0,37, 0,12, 0,04, 0 ng / mL).

Detektion von Antikörpern-HRP: Anti-VEGF-A-Antikörper markiert mit Moringa Peroxidase.

Waschpuffer: 20 x Konzentrat, mit destilliertem Wasser 1:20 verdünnt.

Substratlösung: TMB-Display-Lösung A/B, vor der Verwendung 1:1 gemischt und innerhalb von 15 Minuten verbraucht.

Endlösung: 2M-Lösung.

Probenverdünnung: Verwendet zur Verdünnung von Proben mit hoher Konzentration.

Dichtungsmembran: 2 Blätter zur Abdichtung von Mikroporplatten bei der Wärmezucht.

III. Experimentelle Prinzipien

VEGF-A bindet sich an den vorverpackten gefangenen Antikörper und bildet einen "Antikörper-Antigen"-Komplex; Nach dem Hinzufügen des HRP-Markers zur Erkennung von Antikörpern bildet sich eine "Klemmenstruktur". Nach dem Waschen entfernen Sie die nicht gebundenen Substanzen, fügen Sie TMB-Substrat (blau) und die Endflüssigkeit wird gelb nach Beendigung der Reaktion. Mit einer Wellenlänge von 450 nm wird die Absorption (OD-Wert) gemessen, wobei die Konzentration positiv proportional zum OD-Wert ist.

4. Experimentelle Schritte

Probenvorbereitung

Serum / Plasma: Entfernung von Partikeln durch Zentrifuge und Vermeidung der Blütolyse; 2-8 ° C Lagerung ≤ 48 Stunden, langfristige Lagerung von -20 ° C / -80 ° C (vermeiden Sie wiederholtes Gefrierschmelzen).

Zellreinigung: Zentrifugal entfernen, um hohe Konzentrationen von Protease zu vermeiden.

Reagenzbereitung

Waschflüssigkeit: Wenn die konzentrierte Waschflüssigkeit bei Raumtemperatur kristallisiert wird, wird das 40 ° C Wasserbad nach Auflösung in 1: 20 verdünnt.

Standardprodukt: nach der Wiederlösung verdünnt, jetzt verfügbar.

Substrat: TMB A/B Flüssigkeit 1:1 Mischung, Lichtschutz.

Betriebsprozesse

Probenaufnahme: 100 μL Standard / Probe pro Loch hinzufügen und 90 Minuten bei 37 ° C inkubieren.

Waschen: Die Flüssigkeit im Trocknungsboch schütteln, 1 Minute / Mal mit der Waschflüssigkeit einweichen und 3 Mal wiederholen.

Hinzufügen der Detektion von Antikörpern: 100 µL HRP-markierten Antikörper pro Loch hinzufügen und 60 Minuten bei 37 ° C inkubieren.

Waschen: mit Schritt 2.

Färbung: 90 µL TMB-Substrat pro Loch hinzugefügt und 15-20 Minuten bei 37 ° C Lichtschutz inkubiert.

Termination: 100 µL Termination pro Loch hinzufügen und den OD-Wert innerhalb von 30 Minuten nach der Mischung bestimmen.

Berechnung der Ergebnisse

Die Standardkonzentration (ng/mL) als horizontale Koordinate und der OD-Wert zeichnen die Standardkurve für die longitudinale Koordinate.

Berechnen Sie die Konzentration auf der Grundlage des OD-Wertes der Probe durch die Ersatzkurve und multiplizieren Sie das Verdünnungsvermöglichte.

V. Hinweise

Aufbewahrung des Reagents: Nicht verwendete Kits benötigen 2-8 ° C Lichtschutz, Gültigkeitsdauer von 6 Monaten; Die wiederholten Standardprodukte können aufgeteilt und gefriert werden, um wiederholtes Gefrieren zu vermeiden.

Probenbehandlung: Vermeiden Sie die Verwendung von enthaltenen Proben, um HRP-Aktivität zu verhindern.

Betriebsvorschriften: Pipette erforderlich, um Blasen zu vermeiden; Waschen muss, um Kreuzverschmutzung zu verhindern.

Sicherheitsschutz: Die Endflüssigkeit enthält starke Säure und muss Handschuhe tragen.

6. Erwartete Ergebnisse

Empfindlichkeit: ≤1,54 pg/mL (abhängig von der Anleitung).

Testbereich: Typischer Bereich von 3,12-200 pg/mL, einige Kits erweitert auf 62,5-2000 pg/mL.

Wiederholbarkeit: Der Variationskoeffizient zwischen den Platten und den Platten ist < 10% bzw. < 15%.

7. Häufig gestellte Fragen

F: Zu hell oder zu tief?

A: Anpassung der Probenverdünnungsmehrfach oder Inkubationszeit; Stellen Sie sicher, dass der Untergrund frisch hergestellt wird.

F: Standardkurven?

A: Überprüfen Sie die mehrlösliche Operation, um Blasen zu vermeiden; Ersatz des Pipettensaugekopfs.

Hinweis: Diese Produkte dienen nur der wissenschaftlichen Forschung, nicht als tatsächliche Daten, Experimente müssen die Anweisungen strikt befolgen oder einen technischen Lehrer beraten.

Tianjin Bensheng hat die Qualitätskontrolle als das Leben des Unternehmens betrachtet und die kontinuierliche Verbesserung der Wettbewerbsfähigkeit des Unternehmens verfolgt. Das Unternehmen hält sich im Betrieb immer an: die Einhaltung des Gesetzes, streng an sich selbst, freundlich, wagen, den Unternehmensgeist als Standard zu übernehmen, mit harter Qualität und ausgezeichnetem Service, um den Markt zu erhalten und zu erweitern, um die Bedürfnisse der Kunden im größten Maße zu erfüllen. Win-Win mit unseren Kunden ist unser Entwicklungsziel. Ben! Partner, denen Sie vertrauen. Wir wollen aufrichtig mit Ihnen zusammenarbeiten, um eine schöne Zukunft zu schaffen.