Technische Beschreibung des humanen γ-Interferons (IFN-γ) ELISA-Testkits

BS-0033 Humanes γ-Interferon (IFN-γ) ELISA-Kit

1. Prüfprinzip

Dieses Kit wird mit einem Dual Antibody Intermediate Immunoadsorption Test (ELISA) durchgeführt. Antimenschliche IFN-γ-monoklonale Antikörper werden in eine Mikroporenplatte vorverpackt, nachfolgend werden Proben, Standardprodukte und Biotin-markierte Detektions-Antikörper hinzugefügt, um einen Antikörper-Antigen-Enzym-basierten Antikörper-Komplex zu bilden. Nach dem Waschen wird Streptavidin-HRP (Streptavidin-HRP) gebunden, das mit der Moringa-Peroxidase gekennzeichnet ist, und durch TMB-Substrat gefärbt. Die Farbtöne korrelierte positiv mit der IFN-γ-Konzentration in der Probe und wurde quantitativ mit einem Enzymskalarer zur Absorptionsmessung (OD-Wert) analysiert.

II. Zusammensetzung der Kit

Komponenten 96-Loch-Konfiguration 48-Loch-Konfiguration Speicherbedingungen

Vorverpackte Mikrobohrplatte 12 Löcher x 8 Stücke 12 Löcher x 4 Stücke 2-8 ℃

Gefriertrockner Standard 1 Rohr 1 Rohr 2-8 ℃ (-20 ℃ nach Auflösung)

Biotin-markierte Antikörper 100μL 100μL 2-8 ℃ (Lichtschutz)

Kettenschimmelaffinin-HRP 100μL 100μL 2-8 ℃ (Lichtschutz)

Probeverdünnung 30mL 15mL 2-8 ℃

20 x Waschpuffer 20mL 10mL 2-8 ℃

TMB Substratflüssigkeit 10mL 5mL 2-8 ℃ Lichtschutz

Terminationsflüssigkeit 10mL 5mL 2-8 ℃

Folie 4 Blätter 2 Blätter Raumtemperatur

3. Musteranforderungen

1. Probenart

Serum/Plasma: Verwenden Sie EDTA oder Hepatin-Antikoagulante, um Blutlyse zu vermeiden.

Zellkultur: Entfernung von Partikeln durch Zentrifuge, um wiederholtes Einfrieren zu vermeiden.

Andere körperliche Flüssigkeiten: wie Gehirn-Rücken-Flüssigkeit, Brust-Bauch-Wasser, müssen nach der Klärung untersucht werden.

2. Probenbehandlung

Verdünnungsverhältnis: Serum / Plasma empfiehlt eine 1: 5-Verdünnung (Probe: Verdünnungsflüssigkeit = 1: 4), zelluläres Serum empfiehlt eine 1: 2-Verdünnung.

Lagerbedingungen: Kurzfristige (≤7 Tage) Lagerung bei 2-8 ° C, langfristige Fraktionierung bei -80 ° C (vermeiden Sie wiederholtes Gefrierschmelzen).

4. Experimentelle Schritte

1. Reagenzbereitung

Waschflüssigkeit: Verdünnen Sie das 20-fache Konzentrat in 1-fache Arbeitsflüssigkeit mit destilliertem Wasser (z. B. 20 ml Konzentrat + 380 ml Wasser).

Standardlösung: Gefriertrocknet Standardlösung 1 ml Standardverdünnung hinzufügen, 15 Minuten stehen lassen und eine hohe Konzentration der Mutterlösung zuordnen.

Gradientenverdünnung: Nehmen Sie 7 EP-Röhrchen, fügen Sie 500 μL Verdünnung zu jedem Röhrchen hinzu, mischen Sie 500 μL von der Mutterflüssigkeit in ein Röhrchen und verdünnen Sie es entsprechend (Beispiel: 1000 → 500 → 250 → 125 → 62,5 → 31,25 → 15,625 pg / ml).

2. Proben und Wärmezucht

Zu jedem Loch werden 100 μL Standardprodukt oder verdünnte Proben hinzugefügt (eine Komplexporendetektion wird empfohlen).

37 ° C Lichtschutz für 90 Minuten, Dichtungsmembran versiegelt.

3. Waschen

Füllen Sie die Flüssigkeit im Loch aus, waschen Sie es 3 mal mit 1 x Waschflüssigkeit und einweichen Sie es jeweils 1 Minute lang und trocknen Sie.

4. Anzeige und Beendigung

Zu jedem Loch werden 100 μL Biotin-markierte Antikörper hinzugefügt (im Voraus mit Antikörper-Verdünnung 1: 100 verdünnt), 37 ° C Lichtschutz für 60 Minuten.

Nach dem Waschen wird jedem Loch 100 μL Kettenmoulin-HRP hinzugefügt (im Voraus mit ABC-Verdünnung 1: 100 verdünnt), 37 ° C Lichtschutz für 30 Minuten.

Nach dem Waschen werden 100 μL TMB-Substratflüssigkeit pro Loch hinzugefügt, 37 ° C Lichtschutz für 15-20 Minuten.

Zu jedem Loch werden 50 µL Terminator hinzugefügt, um die Reaktion zu beenden (die Lösung wird von blau zu gelb).

5. Bestimmung

Messung des OD-Wertes der Wellenlänge von 450 nm (Referenzwellenlänge 570-630 nm) innerhalb von 30 Minuten mit einem Enzymskalarer.

V. Berechnung der Ergebnisse

Die Standardkonzentration als horizontale Koordinate und der OD-Wert als longitudinale Koordinate zeichnen Standardkurven (vier Parameter passen).

Basierend auf dem OD-Wert der Probe wird die tatsächliche Konzentration mittels einer Regressionsgleichung berechnet, wenn die Verdünnung der Probe durch ein Verdünnungsvelgfach multipliziert werden muss.

6. Leistungsindikatoren

Parameter Indikatoren

Empfindlichkeit ≤1,0 pg/mL

Detektionsbereich 15,63–1000 pg/mL

Präzision CV <10%

Recyclingquote 83%-113%

Keine Kreuzreaktion mit IL-2, IL-4 usw.

VII. Hinweise

Aufbewahrung des Reagents: unbenutzte Platten müssen dicht bei 2-8 ° C aufbewahrt werden, um Feuchtigkeit zu vermeiden; Die TMB-Substratflüssigkeit muss vor Licht geschützt werden.

Probenbehandlung: Vermeiden Sie die Verwendung von blutlösen, hyperlipidischen Proben; Eine Probe mit hoher Konzentration muss vor dem Experiment zur Bestimmung der Verdünnungsvermöglichungen verwendet werden.

Betriebsvorschriften:

Vermeiden Sie beim Prüfen Blasen, der Pistolenkopf muss ausgetauscht werden.

Die Temperaturzeit wird streng innerhalb der vorgeschriebenen Grenzen kontrolliert, um die Verdunstung zu verhindern.

Qualitätskontrolle: Jedes Experiment erfordert ein leeres Loch (S0) und eine negative Kontrolle.

Sicherheitshinweise: Säurehaltige Flüssigkeiten beenden, Handschuhe tragen; Abfälle werden nach biologischer Gefahr behandelt.

8. Gültigkeitsdauer

Die Kit ist für 6 Monate bei 2-8 ° C gültig, und nach dem Entfernen wird empfohlen, die Standardprodukte bei -20 ° C einzufrieren.

Hinweis: Diese Produkte dienen nur der wissenschaftlichen Forschung, nicht als tatsächliche Daten, Experimente müssen die Anweisungen strikt befolgen oder einen technischen Lehrer beraten.

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