Technische Anleitung zum humanen Glutatein-Peroxidase 4 (GPX4) ELISA-Testkit

BS-9843 Human Glutatein Peroxidase 4 (GPX4) ELISA Kit

Produktübersicht

Diese Kit verwendet eine Dual-Antikörper-Schritt-Elisa-Methode zur quantitativen Messung der Glutatein-Peroxidase-4-Konzentration (GPX4) in Proben wie menschlichem Serum, Plasma, Gewebehomoplasma, Zellloysaten und Zellkultur-Oberserum in vitro. GPX4 ist ein Schlüsselmitglied der Glutatein-Peroxidase-Familie und spielt eine zentrale Rolle bei der Hemmung des Eisentodes, der Aufrechterhaltung der Zellmembranintegrität und dem antioxidativen Stress durch die katalytische Beseitigung von Lipidperoxiden durch reduziertes Glutatein (GSH).

Prüfprinzip

Dual-Antikörper-Klipsierung: Paket wird durch Antikörper mit GPX4 in der Probe gebunden, Biotin-markierte Antikörper bilden einen Komplex, die Kettenmould-Homophilien mit Moringa Peroxidase (HRP) markiert katalysieren die Farbgebung, die Farbgebungsintensität ist proportional zu der GPX4-Konzentration in der Probe.

Spezifisch: GPX4 kann spezifisch erkannt werden, ohne Kreuzreaktion mit Analogen, um die Genauigkeit der Detektion zu gewährleisten.

Zusammensetzung des Kits

Komponenten Spezifikationen / Beschreibung

96-Loch-Platte mit Anti-Human GPX4-Antikörpern

Standard Gefriertrocknetes Pulver, recombinantes humanes GPX4-Protein, vor der Anwendung mit einer verdünnten Flüssigkeit gelöst

Biotin-markierte Antikörper Flüssigkeit, HRP-markierte Antikörper gegen den Menschen GPX4

TMB-Flüssigkeit, 3,3',5,5'-Tetramethylbiphenylamin-Lösung

Endflüssigkeit 2M Schwefelsäure-Lösung

Waschpuffer 20 x Konzentrat mit Twain-20

Probenverdünnung Puffer zum Verdünnen von Proben mit hoher Konzentration

Dichtfilm Transparent für die Dichtung von Mikroporenplatten

Probenbehandlung und Aufbewahrung

Probentyp: Serum, Plasma, Gewebehomoplasma, Zelllysate, Zellkultur-Serum usw.

Behandlungsmethode:

Serum/Plasma: Nach Kogulation bei Raumtemperatur zentrifizieren (3000 U/min, 10 min) und das Serum aufnehmen.

Gewebe Homogenisierung: 10% Homogenisierung mit physiologischem Salzwasser zubereiten und zentrifugieren.

Zell-Lyst: Nach dem Lyst zentrifugieren (15.000 U/min, 10 min) und entfernen.

Lagerbedingungen: Kurzfristige (≤7 Tage) 2-8 ° C Lagerung, langfristige (> 7 Tage) müssen -20 ° C eingefroren werden, um wiederholtes Gefrierschmelzen zu vermeiden.

Vorgehensweise

Standardverdünnung: Standardverdünnung auf 1000 mit Probenverdünnungsflüssigkeit pg/mL、500 pg/mL、250 pg/mL、125 pg/mL、62.5 pg/mL、31.25 pg/mL、15.63 pg/mL，0 pg/mL für den leeren Vergleich.

Probenahme: Fügen Sie 100 μL Standard oder Probe pro Loch und inkubieren Sie bei 37 ° C für 90 Minuten.

Waschen: Entfernen Sie die Flüssigkeit im Loch, füllen Sie jedes Loch mit Waschflüssigkeit, lassen Sie es nach 30 Sekunden wegwerfen, wiederholen Sie es 5 Mal und trocknen Sie.

Biotin-markierte Antikörper hinzufügen: 100 μL Biotin-markierte Antikörper pro Loch hinzufügen und 60 Minuten bei 37 ° C inkubieren.

Zusatz des farbigen Substrats: 90 µL TMB-Substrat pro Loch hinzufügen und 15-30 Minuten bei 37 ° C inkubieren.

Endreaktion: 50 µL Endlösung pro Loch hinzugefügt und die Absorption unmittelbar nach Vermischung gemessen.

Berechnung der Ergebnisse

Instrumenteinstellungen: Enzym-Skalierwellenlänge 450 nm (Referenzwellenlänge 630 nm).

Datenverarbeitung: Standardkonzentration (pg / mL) als horizontale Koordinate, OD-Wert als longitudinale Koordinate, Zeichnung der Standardkurve. Die Probenkonzentration wird durch die Kurvengleichung berechnet und mit dem Verdünnungsverfolgen multipliziert.

Empfindlichkeit: 7,69 pg/mL, Erkennungsbereich 15,62-1000 pg/mL.

Hinweise

Kreuzreaktion: Keine Kreuzreaktion mit GPX1, GPX2 und GPX3.

Betriebsvorschriften:

Die Wäsche muss sauber sein, um Rückstände zu vermeiden, die das Ergebnis beeinflussen.

Die Anzeigezeit wird auf 15-30 Minuten gesteuert, um eine übermäßige Anzeige zu vermeiden, die zu Datenabweichungen führt.

Die Probe vermeidet wiederholtes Gefrierschmelzen, um den Abbau des Proteins zu verhindern.

Qualitätskontrolle: Es wird empfohlen, eine Doppelloch-Replikation für jede Charge zu setzen, wobei der CV-Wert < 10% geeignet ist.

Lagerbedingungen

Nicht geöffnete Kit: 2-8 ° C bei Licht aufbewahren, Gültigkeitsdauer 6 Monate.

Nach der Öffnung: Standardprodukte, Antikörper, Substrate und andere Komponenten werden nach den Anforderungen der Anleitung aufgeteilt und aufbewahrt, um wiederholtes Gefrierschmelzen zu vermeiden.

Diese Anleitung ist ausschließlich für wissenschaftliche Zwecke bestimmt und gilt nicht für die klinische Diagnose. Bitte lesen Sie vor dem Betrieb die vollständige Anleitung sorgfältig und befolgen Sie die Laborsicherheitsvorschriften.

Hinweis: Die oben genannten Informationen dienen zur Forschung.

Die menschliche Glutatein Peroxidase 4 (GPX4) ELISA-Kit von Benson betrachtet die Qualitätskontrolle als das Leben des Unternehmens und verfolgt die kontinuierliche Verbesserung der Wettbewerbsfähigkeit des Unternehmens. Das Unternehmen hält sich im Betrieb immer an: die Einhaltung des Gesetzes, streng an sich selbst, freundlich, wagen, den Unternehmensgeist als Standard zu übernehmen, mit harter Qualität und ausgezeichnetem Service, um den Markt zu erhalten und zu erweitern, um die Bedürfnisse der Kunden im größten Maße zu erfüllen. Win-Win mit unseren Kunden ist unser Entwicklungsziel.