Anleitung zum ELISA-Test von Daidzein bei Ratten

BS-8567 Daidzein-ELISA-Kit für Ratten

Produktübersicht

Diese Kit verwendet eine konkurrenzfähige Enzym-kombinierte Immunabsorption-Methode (ELISA) zur quantitativen Untersuchung des Gehalts an Daidzein in biologischen Proben wie Plasma, Serum oder Gewebehomoplasma von Ratten. Sojasid ist eine natürliche Isoflavonoid-Verbindung mit antioxidativen, entzündungshemmenden und immunregulierenden biologischen Aktivitäten, die weit verbreitet in Bohnenpflanzen vorhanden ist und deren Gehaltstest für pharmakologische Forschung und Ernährungsbewertung von entscheidender Bedeutung ist. Dieses Kit basiert auf dem Prinzip der Antigen-Antikörper-spezifischen Bindung und ermöglicht eine hochempfindliche Detektion durch Enzym-Markierungssignalverstärkung, die für routinemäßige Laboranalysen geeignet ist.

Zusammensetzung des Kits

Vorverpackt mit Mikroporenplatten: 96 Löcher (12 x 8 Löcher), die Platte ist abnehmbar, die Packung ist mit Sojasidin-spezifischen Antikörpern.

Standardprodukt: 6 Konzentrationsgradiente (0,13-61,02 ng/mL), gefriertrocknetes Pulver, vor der Anwendung mit Standardverdünnung gelöst.

Enzymmarker: Konkurrenzantigen mit Moringa Peroxidase (HRP) markiert, braune Lichtschutz erhalten.

Farbiges Substrat: TMB-Lösung, farblose transparente Flüssigkeit.

Endflüssigkeit: 2M Schwefelsäure-Lösung zur Beendigung der Reaktion.

Waschmittel: 20 x konzentrierter Puffer, der mit deionisiertem Wasser verdünnt werden muss.

Probenverdünnung: zur Einstellung der Probenkonzentration auf den Messbereich.

Dichtfilm: 2 Blätter für die Dichtung von Mikroporenplatten.

Anleitung: 1 Stück.

Lagerbedingungen

Nicht geöffnete Kit: Lichtschutz bei 2-8°C, Gültigkeitsdauer 12 Monate.

Nach dem Öffnen: Standardprodukte, Enzymmarker und farbige Substrate müssen aufgeteilt und gefriert werden (-20 ° C), um wiederholtes Gefrierschmelzen zu vermeiden; Mikroporplatten werden trocken und dicht bewahrt.

Es ist verboten, die konzentrierte Waschflüssigkeit einzufrieren, um die Kristallisation zu verhindern.

Probenbehandlung

Plasma-/Serumproben: Unmittelbar nach der Entnahme zentrifugieren (3.000 U/min, 10 min), das Serum entnehmen und bei -80°C aufbewahren. Vermeiden Sie Blutlösung.

Gewebe-Homogenisierung: Gewebe abwägen, physiologisches Salzwasser (1: 9 w / v) hinzufügen, um zu homogenisieren und die Reinigungsflüssigkeit mittels Zentrifuge abzunehmen.

Hinweis: Sojasid in der Probe kann in einem gebundenen Zustand vorhanden sein, es wird empfohlen, eine Beta-Glucosaldehydasehydrolyse zu verwenden, um die Detektionsempfindlichkeit zu verbessern. Die Probe muss entweder zentrifugiert (5000 U/min, 10 min) oder filtriert werden (0,22 μm Membran).

Experimentelle Schritte

1. Reagenzbereitung

Waschmittel: Verwenden Sie deionisierendes Wasser, um den 20-fachen Konzentrat auf 1-fach zu verdünnen (z. B. 10 ml Konzentrat + 190 ml Wasser).

Standardgradient: Das gefriertrocknete Standardprodukt wird mit einer Standardverdünnung wieder gelöst und auf 0,13, 0,39, 1,17, 3,51, 10,53 und 61,02 ng/mL verdünnt.

Probeverdünnung: Verwenden Sie eine Probeverdünnungsflüssigkeit, um die zu prüfende Probe in den Nachweisbereich zu verdünnen (es wird empfohlen, das Verdünnungsvervielfachen vor dem Experiment zu bestimmen).

2. Prüfung und Inkubation

Zu jedem Loch werden 100 μL Standardprodukt oder Probe hinzugefügt (nur Probenverdünnung mit leerem Loch).

Zu jedem Loch werden 50 µL Enzymmarker hinzugefügt und leicht geschüttelt.

37 ° C Lichtschutz inkubieren für 60 Minuten.

3. Waschen

Entfernen Sie die Flüssigkeit im Loch, fügen Sie 350 μL Waschflüssigkeit zu jedem Loch hinzu, lassen Sie es nach 30 Sekunden trocknen, wiederholen Sie es 5 Mal und trocknen Sie.

4. Anzeige und Beendigung

Zu jedem Loch werden 100 µL farbiges Substrat hinzugefügt und bei 37 ° C für 15 Minuten inkubiert.

Zu jedem Loch werden 100 µL Termination zugegeben und leicht geschüttelt.

5. Bestimmung

Die Absorption (OD-Wert) wird sofort mit einem Enzym-Skalierer bei einer Wellenlänge von 450 nm gemessen, mit Bezug auf eine Wellenlänge von 630 nm.

Berechnung der Ergebnisse

Zeichnung der Standardkurve: Standardkonzentration (ng / mL) als Querkoordinaten, OD-Wert als Längskoordinaten, passend zu den vier Parametern der logischen Kurve (empfohlen, professionelle Software zu verwenden).

Berechnung der Probenkonzentration: Ersetzen Sie die Standardkurvengleichung nach dem OD-Wert der Probe und multiplizieren Sie es mit dem Verdünnungsvermöglichten, um die tatsächliche Konzentration zu erhalten.

Leistungsparameter

Empfindlichkeit: Messgrenze 0,13 ng/mL.

Genauigkeit: Innerer Variationskoeffizient (CV) < 10%, Zwischenplatten-CV < 15%.

Recyclingquote: 80-120% (Validierungsmethode: Label-Recycling-Experiment).

Linearer Bereich: 0,13–61,02 ng/mL, Korrelationskoeffizient r²≥0,98.

Spezifischkeit: Kreuzreaktionsrate mit ähnlichen strukturellen Verbindungen (z. B. Farbstoff Holz) < 5%.

Hinweise

Betriebsvorschriften: Vermeiden Sie den Kontakt von Enzymmarkern und farbigen Substraten mit Metallionen; Messung innerhalb von 30 Minuten nach der Anzeige, um Signalverlust zu verhindern.

Qualitätskontrolle: Jede Partie muss Standardkurven und Qualitätskontrollproben enthalten (empfohlene hohe, mittlere und niedrige Konzentrationen).

Sicherheitsschutz: Die Endflüssigkeit enthält starke Säure und muss Handschuhe und Schutzbrillen tragen.

Abfallbehandlung: Enzymhaltige Abfälle müssen nach der Inaktivierung entsorgt werden.

Häufig gestellte Fragen

Niedriges Signal: Überprüfen Sie, ob die Inkubationszeit oder die Temperatur unzureichend sind; Überprüfen Sie, ob die Waschkarten ausreichend sind.

Hoher Hintergrundwert: Es kann aufgrund des Nichtwaschens oder der Störung der Probenmatrix sein, es wird empfohlen, die Anzahl der Wäsche zu erhöhen oder die Vorbehandlung der Probe zu optimieren.

Standardkurvenabweichungen: Komplexe Standardprodukte müssen ausreichend vermischt werden, um zu vermeiden, dass Blasen die Konzentrationsgenauigkeit beeinflussen.

Hinweis: Dieses Produkt dient ausschließlich der wissenschaftlichen Nutzung und dient nicht als experimentelle Grundlage. Bitte beachten Sie die praktischen Bedienungsanleitungen.

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