Experimentelle Anleitung für Ratten Glutatein Reduktase (GSR) ELISA Kit

BS-3507 Ratten Glutatein Reduktase (GSR) ELISA-Kit

I. Experimentelle Prinzipien

Dieses Kit untersucht die Glutatein-Reduktionase-Aktivität (GSR) bei Ratten mit einer Dual-Antikörper-Elisa-Methode. Anti-Ratten GSR Antikörper Paket wurde in eine Mikroporenplatte und nach dem Hinzufügen der zu testenden Probe, die GSR in der Probe mit dem Paket durch Antikörper gebunden. Anschließend werden Biotin-markierte Detektions-Antikörper hinzugefügt, um einen "Antikörper-Antigen-Enzym-markierten Antikörper"-Komplex zu bilden. Nach dem Hinzufügen von Kettenmoulphilin (SABC), das mit Moringa Peroxidase (HRP) gekennzeichnet ist, wurde die Absorptionsfähigkeit (OD-Wert) bei einer Wellenlänge von 450 nm durch TMB-Substrat gefärbt, wobei der OD-Wert positiv mit der GSR-Konzentration in der Probe korreliert.

II. Zusammensetzung der Kit

Komponenten 48-Loch-Konfiguration 96-Loch-Konfiguration Speicherbedingungen

Vorverpackte enzymatisch markierte Platte 8 x 6 8 x 12 2-8 ℃

Standardartikel (Gefriertrocknet) 1 Stück 1 Stück 2-8 ℃

Standardprodukt / Probeverdünnung 10mL 15mL 2-8 ℃

Antikörper zur Biochemischen Detektion 60 μL (100 x) 120 μL (100 x) -20 ℃

Biotinisierte Antikörper-Verdünnung 6mL 12mL 2-8 ℃

SABC-Komplex 6mL 12mL 2-8 ° C

TMB-Farbdesignation (A/B) jeweils 3mL jeweils 6mL Lichtschutz 2-8 ℃

Endflüssigkeit 6mL 12mL 2-8 ℃

20 x konzentrierte Waschmittel 30mL 60mL Raumtemperatur

Folie 2 Stück 4 Stück Raumtemperatur

Anleitung 1 Exemplar 1 Exemplar -

3. Probenbehandlung

Serum-/Plasmaproben:

Lassen Sie die ganze Bluttemperatur für 2 Stunden oder 4 ° C über Nacht, 1000 g für 20 Minuten zentrifugieren und nehmen Sie die Reinigung auf.

Vermeiden Sie Blutlose oder hyperlipidische Proben, 2-8 ° C kann 48 Stunden aufbewahrt werden; Langfristige Aufbewahrung von -20 ° C oder -80 ° C, um wiederholtes Gefrierschmelzen zu vermeiden.

Gewebe-/Zellproben:

Nach Gewebehomologation oder Zellklyse wird die Proteinkonzentration auf den empfohlenen Bereich angepasst.

4. Experimentelle Schritte

Waschflüssigkeitsformerierung:

Verdünnen Sie die 20 x konzentrierte Waschflüssigkeit 20 mal mit destilliertem Wasser (z. B. 1 ml Konzentration + 19 ml destilliertes Wasser).

Standardverdünnung:

Nehmen Sie 7 Zentrifugerrohre und markieren Sie 1/2, 1/4, 1/8, 1/16, 1/32, 1/64, leer (Blank).

Zu jedem Röhrchen werden 200 μL Standard-/Probenverdünnung hinzugefügt. Zu den ersten Röhrchen werden 200 μL Standard-Originalflüssigkeit hinzugefügt und nach dem Vermischen allmählich verdünnt.

Inkubation und Inkubation:

Zu jedem Loch 100 μL Standard oder Probe hinzufügen und 90 Minuten bei 37 ° C inkubieren.

Entfernen Sie die Flüssigkeit und waschen Sie sie dreimal (1-2 Minuten jedes Einweichen).

Enzymatische Antikörper:

Zu jedem Loch werden 100 μL Biotinisierungs-Detektions-Antikörper hinzugefügt (1: 100 verdünnt) und 60 Minuten bei 37 ° C inkubiert.

3 Mal waschen.

SABC-Komplexreaktionen:

Zu jedem Loch werden 100 µL SABC-Komplex hinzugefügt und 30 Minuten bei 37 ° C inkubiert.

3 Mal waschen.

Anzeige und Beendigung:

Zu jedem Loch werden 90 µL TMB-Display-Flüssigkeit (A / B-Flüssigkeit-Äquivalent-Mischung) hinzugefügt und 15 Minuten lang bei 37 ° C inkubiert.

Zu jedem Loch werden 50 µL Termination hinzugefügt und sofort nach Vermischung gemessen.

V. Berechnung der Ergebnisse

Mit der Standardkonzentration als horizontale Koordinate (X) und dem OD-Wert als longitudinale Koordinate (Y) wird die Standardkurve gezeichnet.

Berechnen Sie die GSR-Konzentration anhand des OD-Wertes der Probe durch die Standardkurvengleichung.

VI. Hinweise

Aufbewahrung des Reagents:

Standardprodukte, biotinierte Antikörper müssen -20 ° C aufbewahrt werden, um wiederholtes Gefrierschmelzen zu vermeiden; Die anderen Komponenten werden bei 2-8 ° C aufbewahrt.

Probenbehandlung:

Vermeiden Sie die Verwendung von blutlösen, hyperlipidischen oder trüben Proben; Gewebeproben müssen ausreichend homogenisiert werden.

Betriebsvorschriften:

Pipettierung muss genau sein, um Kreuzkontamination zu vermeiden; Waschbedarf, Restflüssigkeit beeinflusst das Ergebnis.

Instrumentkalibrierung:

Die enzymatische Wellenlänge muss auf 450 nm kalibriert werden und das leere Loch auf Null eingestellt werden.

Sicherheitsschutz:

Die Endflüssigkeit enthält Schwefelsäure und trägt Handschuhe und Schutzbrillen beim Betrieb.

7. Erwartete Ergebnisse

Empfindlichkeit: GSR bis zu 0,156ng/ml erkennbar.

Linearer Bereich: 0,156-10ng / ml.

8. Anwendungsbereich

Diese Kit eignet sich für die quantitative Untersuchung von GSR in Ratten-Serum, Plasma, Gewebehomologation und Zellkultur-Serum für wissenschaftliche Zwecke.

Tipp: Bitte beachten Sie die praktische Kit-Anleitung, die vollständige Anleitung vor dem Experiment lesen und die Integrität der Komponenten bestätigen.

Hinweis: Das obige ist nur zur Referenz, dieses Reagenz ist nur für die wissenschaftliche Forschung, nicht als tatsächliche Daten, das Experiment muss die Anweisungen strikt befolgen oder einen technischen Lehrer konsultieren.